Polymerase Chain Reaction (PCR) real time system

Bioer Line-Gene KFQD-48A

Polymerase Chain Reactionreal time system juga dikenal sebagai reaksi rantai polimerase kuantitatif (qPCR), adalah  teknik laboratorium  biologi molekuler berdasarkan polymerase chain reaction. Ini memonitor amplifikasi molekul DNA yang ditargetkan selama PCR, yaitu secara real-time, dan tidak pada akhirnya, seperti pada PCR konvensional.PCR real-time dapat digunakan secara kuantitatif (kuantitatif PCR real-time), dan semi-kuantitatif, yaitu di atas / di bawah sejumlah tertentu molekul DNA (semi kuantitatif real-time PCR).

 

Dua metode umum untuk mendeteksi produk PCR secara real-time PCR adalah: (1) pewarna fluorescent non-spesifik yangintercalate dengan DNA beruntai ganda, dan (2) probe DNA urutan tertentu yang terdiri dari oligonukleotida yang diberi label dengan wartawan fluoresen yang memungkinkan deteksi hanya setelah hibridisasi probe dengan urutan komplementernya.

PCR real-time dilakukan dalam pengendara sepeda termal dengan kapasitas untuk menerangi setiap sampel dengan seberkas cahaya setidaknya satu panjang gelombang tertentu dan mendeteksi fluoresensi yang dipancarkan oleh fluorophore yang bersemangat. Pengendara termal juga dapat dengan cepat memanaskan dan mendinginkan sampel, sehingga mengambil keuntungan dari sifat fisikokimia asam nukleat dan polimerase DNA .

Proses PCR umumnya terdiri dari serangkaian perubahan suhu yang diulang 25 – 50 kali. Siklus ini biasanya terdiri dari tiga tahap: yang pertama, sekitar 95 °C, memungkinkan pemisahan rantai ganda asam nukleat; yang kedua, pada suhu sekitar 50-60 °C, memungkinkan pengikatan primer dengan template DNA;  yang ketiga, di antara 68 – 72 °C, memfasilitasi  polimerisasi yang dilakukan oleh polimerase DNA. Karena ukuran kecil dari fragmen, langkah terakhir biasanya dihilangkan dalam jenis PCR ini karena enzim mampu meningkatkan jumlah mereka selama perubahan antara tahap penyelarasan dan tahap denaturasi. Selain itu, dalam empat langkah PCR fluoresensi diukur selama fase suhu pendek yang hanya berlangsung beberapa detik dalam setiap siklus, dengan suhu, misalnya, 80 °C, untuk mengurangi sinyal yang disebabkan oleh kehadiran dimer primer saat pewarna non-spesifik digunakan. Suhu dan timing yang digunakan untuk setiap siklus tergantung pada berbagai parameter, seperti: enzim yang digunakan untuk mensintesis DNA, konsentrasi ion divalen dan deoksiribonukleotida (dNTPs) dalam reaksi dan suhu pengikatan dari primer. Spesifikasi Polymerase Chain Reaction (PCR)  real time system       Bioer Line-Gene KFQD-48A adalah ;

 

Sample capacity : 48 x 0.2 ml
Dynamic range : 10-10E10  copies
Sample volume rang : 10-100μl
Excitation light ,detecting : 470nm (F1); 523nm(F2); 543nm(F3); 571nm(F4)
Wavelength, detecting : 525nm(F1), 564nm(F2), 584nm(F3); 612nm(F4)
Fluorescence, detecting : fam, sybr greenⅰ,lc705, lc640 and so on
Temperature range : 4°c – 99.9 °c
Ramping rate (max.) : 4.0°c /sec (max.)
Temperatur uniformity of block : ≤ ±0.3
Temperatir control accuracy : ≤ ±0.1°c
Power supply : ac220v 50hz 800w
Operating system : windows 2000/xp